狂犬病的临床症状有早期类似感冒、中期兴奋期怕风恐水等、晚期麻痹期致死亡,特殊人群症状可能不典型;实验室检测方法包括病毒分离、抗原检测(免疫荧光抗体法、ELISA)、核酸检测(RT-PCR、实时荧光定量PCR)、抗体检测(中和抗体检测、FAVN);动物实验可将标本接种健康动物脑内观察是否出现相关症状来辅助判断,特殊人群相关操作需注意规范。
一、临床症状观察
狂犬病患者在病程中会出现一些典型临床症状,早期可能有低热、倦怠、头痛、恶心、全身不适等类似感冒的症状,继而对痛、声、光、风等刺激敏感,并有喉咙紧缩感。进入兴奋期后,患者逐渐出现烦躁不安、怕风、恐水等表现,恐水是狂犬病的特殊症状,典型患者见水、闻流水声甚至仅提及饮水时,可引起严重咽喉肌痉挛。麻痹期时患者肌肉痉挛停止,进入全身弛缓性瘫痪,最终因呼吸、循环衰竭而死亡。但对于儿童等特殊人群,临床症状可能不典型,需更细致观察与鉴别。
二、实验室检测方法
(一)病毒分离
从患者唾液、脑脊液、角膜印片、皮肤切片等标本中分离病毒,是较可靠的方法,但操作复杂、耗时较长,一般在狂犬病防控的专业机构进行。例如,将标本接种于小鼠脑内等适宜的实验动物或细胞培养系统中,观察动物发病情况或细胞病变等以判断是否有狂犬病病毒存在。
(二)抗原检测
1.免疫荧光抗体法:采用荧光标记的特异性抗体,检测患者唾液、角膜印片、皮肤切片等标本中的狂犬病病毒抗原。其原理是抗原抗体特异性结合,通过荧光显微镜观察是否有荧光出现来判断是否存在病毒抗原。这种方法灵敏度较高、特异性较强,可在数小时内出结果,对于早期诊断有一定价值。
2.酶联免疫吸附试验(ELISA):利用抗原抗体反应和酶的催化作用,通过检测酶反应产物来判断是否存在狂犬病病毒抗原。该方法相对简便、易于操作,可用于大规模样本的初步筛查等情况。
(三)核酸检测
1.反转录聚合酶链反应(RT-PCR):通过提取标本中的RNA,反转录成cDNA后进行PCR扩增,检测狂犬病病毒的核酸。RT-PCR具有很高的灵敏度和特异性,能在病毒含量较低时检测到病毒核酸,可用于狂犬病的早期诊断以及对一些不典型病例的辅助诊断等。例如,对患者的唾液、脑脊液等标本进行RT-PCR检测,若能扩增出特异性的狂犬病病毒核酸片段,则可确诊。
2.实时荧光定量PCR:在RT-PCR基础上,通过荧光信号实时监测PCR进程,能更准确地定量检测狂犬病病毒核酸,相比普通RT-PCR更加精准、快速,在临床诊断和病毒载量监测等方面有重要应用。
(四)抗体检测
1.中和抗体检测:采用病毒中和试验等方法检测患者血清中的中和抗体。狂犬病病毒中和抗体是机体针对狂犬病病毒产生的具有保护作用的抗体,一般在感染狂犬病病毒一段时间后才会出现,对于已发病的患者检测中和抗体可能意义不大,但对于暴露前或暴露后预防接种效果的评估等有重要价值。例如,通过将患者血清与一定量的狂犬病病毒混合,然后接种到细胞或实验动物中,观察病毒对细胞或动物的感染情况,以判断血清中中和抗体的水平。
2.荧光抗体病毒中和试验(FAVN):也是检测狂犬病病毒中和抗体的一种方法,利用荧光标记技术来检测中和抗体的效果,可较为准确地评估机体对狂犬病病毒的免疫状态等。
三、动物实验检测
将患者的唾液等标本接种于健康的实验动物(如小鼠等)脑内,观察动物是否出现狂犬病相关症状,如运动失调、麻痹等,以此来辅助判断是否感染狂犬病病毒。但动物实验有一定的局限性和生物安全风险,且需要在符合规定的生物安全实验室进行操作。对于特殊人群,如儿童,在涉及动物实验相关操作时需特别注意生物安全防护以及实验动物的选择和操作规范等,避免因实验操作不当带来额外风险。



