免疫检测包含包被抗原或抗体于微孔板、封闭消除非特异性吸附、加入待测样本及对照、温育使特异性结合、多次洗涤、加酶标二抗、再洗涤、加底物显色、加终止液、测吸光度，不同年龄人群采集要轻柔操作，性别一般不影响检测步骤但样本生理状态可能因性别有差异，生活方式中特殊饮食等情况需在报告说明对结果潜在影响，有病史患者需结合病史综合分析且特殊人群操作要更谨慎以保证样本质量和检测准确性。
一、包被
将抗原或抗体用合适的缓冲液稀释至适当浓度，取适量加入酶联免疫吸附测定板（微孔板）的微孔中，4℃过夜或37℃孵育一定时间（如1-2小时），使抗原或抗体吸附于微孔板孔壁上。
二、封闭
为消除非特异性吸附，向微孔中加入封闭液（常用牛血清白蛋白等），37℃孵育一段时间（通常0.5-1小时），封闭微孔板上未被结合的位点。
三、加样
1.加入待测样本：将处理好的待测样本加入微孔板相应孔中；2.加入对照：同时加入阳性对照和阴性对照，阳性对照用于验证检测系统有效性，阴性对照用于排除非特异性反应干扰。
四、温育
将微孔板置于适宜温度（如37℃）孵育一定时间（一般15-30分钟），使样本中的抗原或抗体与微孔板上已吸附的抗体或抗原充分特异性结合。
五、洗涤
用洗涤液（如含吐温的缓冲液）多次洗涤微孔板，洗去未结合的物质，通常洗涤3-5次，确保背景干净，减少非特异性干扰。
六、加酶标二抗
向微孔中加入酶标记的特异性抗体（酶标二抗），37℃孵育一定时间（如15-30分钟），使酶标二抗与已结合的抗原或抗体结合。
七、再次洗涤
重复洗涤步骤，再次用洗涤液洗去未结合的酶标二抗，保证孔内物质纯净。
八、加底物显色
向微孔中加入相应的底物溶液，在酶的催化作用下，底物发生显色反应，不同酶对应的底物显色情况不同（如辣根过氧化物酶常用邻苯二胺等底物显色呈黄色，碱性磷酸酶常用对硝基苯磷酸酯等底物显色呈紫色）。
九、终止反应
加入终止液终止酶促反应，终止显色进程，常用的终止液如酸性溶液等，会使显色反应停止。
十、测定吸光度
使用酶标仪测定各微孔在特定波长下的吸光度值，根据预先绘制的标准曲线，计算出待测样本中目标物质的含量。
对于不同年龄人群，样本采集需根据年龄特点进行，如儿童样本采集要注意轻柔操作避免过度应激；性别一般不影响检测步骤本身，但样本来源的生理状态可能因性别有差异；生活方式方面，若样本采集前有特殊饮食等情况可能需在报告中说明对检测结果的潜在影响；有病史的患者，若病史涉及样本相关指标，可能需结合病史综合分析检测结果，但检测步骤本身按上述流程进行，特殊人群在操作时需更谨慎以保证样本质量和检测准确性。
