ELISA法检测乙肝表面抗体基于抗原-抗体特异性结合原理，操作步骤有标本采集（静脉采血分离血清等）、试剂准备（取出试剂盒恢复室温）、加样（设孔加样）、温育、洗涤、显色终止、比色测定，结果通过标准曲线和临界值判读，特殊人群需注意儿童操作、特殊病史患者采血及标本保存运输等且要依试剂盒说明书规范操作。
一、ELISA法检测乙肝表面抗体的基本原理
酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测乙肝表面抗体基于抗原-抗体特异性结合原理。将乙肝表面抗原包被于固相载体，待检标本中的乙肝表面抗体与之结合，随后加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体，形成固相载体-抗原-抗体-酶标记抗体复合物，加入酶底物后发生显色反应，通过酶标仪测定吸光度值，依据标准曲线计算标本中乙肝表面抗体的含量。
二、具体操作步骤
（一）标本采集
通常采用静脉采血，收集血液后离心分离血清，注意避免标本溶血、污染等情况，分离后的血清应妥善保存，尽快检测（若不能及时检测，可置于2~8℃保存不超过48小时，长期保存需-20℃冷冻）。
（二）试剂准备
取出试剂盒，包括预包被乙肝表面抗原的酶标板、样本稀释液、酶标记物、底物溶液、终止液及标准品等，将各试剂恢复至室温（一般18~25℃）。
（三）加样
1.设标准品孔和样本孔，标准品孔加入不同浓度的乙肝表面抗体标准品，样本孔加入适量待检血清标本，同时设空白对照孔。
2.每孔加样量遵循试剂盒说明书要求，一般为50~100μL。
（四）温育
将酶标板置于37℃恒温箱中温育一定时间（如30分钟），使抗原抗体充分反应。
（五）洗涤
弃去孔内液体，用洗涤液洗板3~5次，每次洗涤后甩干，以去除未结合的物质。
（六）显色与终止
向各孔加入底物溶液，再次温育（如15分钟）后，加入终止液终止反应，终止液通常为强酸溶液，使显色反应停止。
（七）比色测定
用酶标仪在规定波长（一般为450nm）下测定各孔的吸光度值（OD值）。
三、结果判读
1.根据标准品的OD值绘制标准曲线，计算出标本中乙肝表面抗体的浓度。
2.通常设定临界值，当标本OD值≥临界值时判为阳性，提示体内存在乙肝表面抗体；若OD值<临界值则判为阴性，提示体内乙肝表面抗体水平较低或无。
四、特殊人群注意事项
（一）儿童
采血时需由专业人员轻柔操作，安抚儿童情绪，避免因哭闹导致采血不顺利，采血后注意按压止血部位，确保安全。
（二）特殊病史患者
对于有凝血功能障碍等病史的患者，采血后要延长按压时间，防止局部血肿形成；若患者处于急性疾病发作期，采血前需充分评估其身体状况，确保采血过程安全，避免加重病情。
（三）标本保存与运输
标本保存和运输过程中需严格遵循温度要求，血清标本短期保存于2~8℃，长期保存需-20℃冷冻，运输时应采用冷链运输，保证标本质量，避免影响检测结果的准确性。
需严格按照ELISA试剂盒说明书规范操作，以确保乙肝表面抗体检测结果的准确性，不同试剂盒具体操作细节可能存在差异，实际操作中应严格遵循产品说明书要求。
