生殖器疱疹的确诊需结合典型临床表现、病史采集及实验室检查，其中病毒培养（HSV分离培养）为诊断金标准，核酸检测（PCR）敏感性高且快速，适用于早期或症状不典型病例。
临床表现与病史采集
典型症状为生殖器或肛周出现簇集性小水疱，迅速破溃形成浅表溃疡，伴疼痛、灼热感或瘙痒，病程1-2周可自愈，但易反复发作；需详细询问高危性接触史（如多性伴、无保护性行为）、既往生殖器疱疹发作史（多次复发），并排除梅毒、淋病、软下疳等其他性传播疾病接触史，作为初步诊断依据。
病毒培养与核酸检测
病毒培养（HSV分离培养）是国际公认的诊断金标准，通过无菌采集疱液、溃疡渗出液或水疱底部组织，接种于Vero细胞等敏感细胞系，48-72小时观察细胞病变效应（CPE），阳性可明确HSV感染及病毒类型（HSV-1或HSV-2）；核酸检测（PCR）通过直接扩增病毒DNA实现高敏感性（检出限达10-100拷贝/ml）和特异性（准确率>95%），适用于感染早期（症状出现48小时内）、症状不典型（如仅表现为红斑、丘疹）或免疫低下者，检测时间短（1-2小时出结果），是急诊或复杂病例的首选方法。
血清学抗体检测
血清学检测通过检测HSV特异性IgM和IgG抗体辅助诊断：IgM抗体在感染早期（发病后3-7天）出现阳性，可提示近期感染，但感染7天内可能因抗体尚未产生而出现假阴性；IgG抗体在恢复期（2-4周）转为阳性，可持续多年，可用于回顾性诊断或流行病学调查，但无法区分HSV-1/2型，也不能判断病毒是否处于活动期（即无法区分既往感染或现症感染）。
鉴别诊断检查
生殖器疱疹需与其他生殖器溃疡疾病鉴别，如梅毒硬下疳（无痛性圆形溃疡，伴腹股沟淋巴结肿大）、软下疳（疼痛性溃疡，有脓性分泌物及卫星溃疡）、腹股沟肉芽肿（肉芽肿性溃疡，边缘隆起呈潜行性）、白塞病（复发性口腔溃疡、生殖器溃疡、眼炎三联征）等；必要时结合溃疡处细胞学检查（可见多核巨细胞、核内包涵体）或病理活检（见特征性组织病理学改变），排除其他病原体感染（如HSV合并HPV、梅毒螺旋体等），避免误诊或漏诊。
特殊人群注意事项
孕妇感染HSV-2时，需在孕晚期（35-37周）筛查宫颈或阴道分泌物病毒载量，若存在活动性感染，建议行剖宫产以降低新生儿经产道感染风险；HIV感染者或长期使用免疫抑制剂者感染HSV后，症状可能不典型（如溃疡面积大、病程延长至3周以上），且易合并播散性感染（如肺炎、脑炎），诊断需结合PCR检测病毒载量及临床症状综合判断；新生儿感染HSV时，需结合母亲孕期感染史（尤其是孕晚期）及新生儿临床表现（发热、皮肤黏膜疱疹、抽搐等），通过脑脊液检查、PCR检测明确诊断，避免延误治疗。
