吉尔伯特综合征的诊断需经过病史采集询问症状表现及家族史、体格检查观察皮肤巩膜等及腹部脏器、实验室检查包括血清胆红素测定（总胆红素轻度升高且非结合胆红素为主、结合胆红素与总胆红素比值小于%）、肝功能其他指标检查（ALT、AST等通常正常或轻度升高）、UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性检测（该酶活性降低）、基因检测（发现UGT1A1基因启动子区TA重复序列异常等突变）并排除溶血性贫血、Crigler-Najjar综合征、遗传性球形红细胞增多症等其他可引起非结合胆红素升高的疾病。
一、病史采集
详细询问患者的症状表现，包括是否有黄疸相关表现，如皮肤、巩膜黄染等，了解黄疸出现的时间、诱因（如感染、饥饿、劳累等）、持续时间及变化情况。同时，询问家族中是否有类似疾病患者，因为吉尔伯特综合征具有一定遗传倾向，常为常染色体显性遗传。不同年龄、性别的人群都可能患病，生活方式如是否有过度劳累、饥饿等情况也可能影响黄疸的表现，对于有相关家族病史的人群，需重点排查。
二、体格检查
进行全面的体格检查，重点观察皮肤、巩膜黄疸情况，检查肝脏、脾脏等腹部脏器，一般吉尔伯特综合征患者肝脏、脾脏通常无明显肿大。不同年龄阶段的儿童和成人在体格检查时重点略有不同，儿童需注意生长发育情况与黄疸表现的关系，成人则关注整体健康状况与黄疸的关联。
三、实验室检查
1.血清胆红素测定
总胆红素一般轻度升高，通常在34.2μmol/L以下，以非结合胆红素升高为主。不同年龄人群的正常胆红素范围略有差异，儿童的正常总胆红素范围相对成人更低，新生儿有其特殊的胆红素代谢特点，吉尔伯特综合征患者非结合胆红素升高符合其疾病特点。
结合胆红素与总胆红素比值常小于15%。通过检测血清胆红素水平及结合胆红素与总胆红素比值，可初步提示黄疸类型为非结合胆红素升高为主的情况。
2.肝功能其他指标检查
丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）等通常正常或轻度升高。这是因为吉尔伯特综合征主要是胆红素代谢相关酶的缺陷导致，一般肝脏实质细胞损伤较轻，所以肝功能的这些常规指标多无明显异常改变。不同年龄人群的ALT、AST正常范围不同，儿童的酶学指标正常范围与成人有别，需依据相应年龄段标准判断。
3.UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性检测
检测尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UDP-GT）活性，患者该酶活性降低。通过特殊的酶活性检测方法可发现患者此酶活性存在异常，这是吉尔伯特综合征的发病机制相关指标，对于确诊有重要意义。不同年龄人群的该酶活性正常范围有差异，检测时需考虑年龄因素。
4.基因检测
进行UGT1A1基因检测，可发现UGT1A1基因启动子区TA重复序列异常，如2型等位基因（UGT1A128）等突变。基因检测是确诊吉尔伯特综合征的重要依据，通过对特定基因的检测，能够明确患者是否存在致病基因变异，从而确诊该病。不同人群的基因检测结果解读需结合其年龄、家族病史等情况综合判断。
四、排除其他疾病
需排除其他可引起非结合胆红素升高的疾病，如溶血性贫血、Crigler-Najjar综合征、遗传性球形红细胞增多症等。通过完善血常规、红细胞脆性试验、Coombs试验等相关检查来排除这些疾病。不同疾病有其各自的实验室检查特点和临床表现，通过与吉尔伯特综合征的鉴别，进一步明确诊断。例如溶血性贫血常有红细胞破坏增加的证据，如血红蛋白降低、网织红细胞升高、Coombs试验阳性等；Crigler-Najjar综合征病情较重，常伴有严重的胆红素升高及神经系统症状，与吉尔伯特综合征的轻度黄疸表现不同。
