心肌原代细胞培养方法是组织消化与细胞分离、差速贴壁法纯化心肌细胞、细胞接种与培养条件等。
1、组织消化与细胞分离
将心室组织剪成细小碎块，使用胰蛋白酶和胶原酶进行分步、间歇性消化。通过反复吹打和过筛，收集含有心肌细胞的悬液，以终止消化并获取单个细胞。
2、差速贴壁法纯化心肌细胞
利用成纤维细胞贴壁更快的特点，将细胞悬液接种于培养瓶中进行短时间预贴壁。随后收集未贴壁或贴壁不牢的细胞悬液，此步骤能有效富集心肌细胞。
3、细胞接种与培养条件
将纯化后的细胞以适宜密度接种于预先包被明胶的培养板中。使用含血清的高糖培养基，在百分之五二氧化碳、三十七摄氏度的恒温培养箱中进行培养。
接种后数小时，心肌细胞开始贴壁伸展，呈梭形或不规则形。需定期在显微镜下观察细胞搏动情况。根据培养基颜色变化，每隔两到三天更换一次新鲜培养液。
