男性支原体感染检查主要通过尿道分泌物涂片、培养或核酸检测（如PCR），需结合临床症状（如尿道刺痛、分泌物增多），检查结果需24~48小时出，培养法更精准但耗时。
- 尿道分泌物检查：取尿道或前列腺液涂片，革兰染色镜检找支原体，适用于急性期有分泌物者，阳性率约50%~70%。
- 支原体培养：将分泌物接种于专用培养基，48~72小时观察菌落生长，是诊断金标准，可区分解脲支原体（Uu）与人型支原体（Mh），但耗时较长。
- 核酸检测（PCR）：直接检测病原体核酸，敏感性高（>90%），1~2小时出结果，适用于症状不典型或培养阴性者，需注意样本污染可能影响准确性。
- 血清学检测：检测支原体抗体（IgM/IgG），仅用于回顾性诊断或流行病学调查，急性期IgM阳性提示近期感染，但需结合临床。
特殊人群提示：性活跃男性（20~40岁）风险高，性伴侣需同时检查；合并尿道炎、前列腺炎者建议做前列腺液检查；孕妇（虽非男性，但相关提示）需避免孕期感染影响胎儿。
