强直性脊柱炎通过临床表现评估（腰背痛等特点及不同人群表现）、影像学检查（X线、CT、MRI对骶髂关节病变的不同诊断价值）、实验室检查（HLA-B27检测及炎症指标检测）综合判断，患者有典型表现结合相应影像学及实验室结果可确诊。
影像学检查
X线检查：骶髂关节是强直性脊柱炎常累及的部位，早期X线可能无明显异常，随着病情进展，可见骶髂关节面模糊、骨质侵蚀、硬化，关节间隙变窄甚至消失等改变。对于怀疑强直性脊柱炎的患者，X线检查是初步筛查的重要手段，但X线对于早期病变的敏感性相对有限。
CT检查：CT检查尤其是高分辨CT对于骶髂关节病变的诊断价值更高，能更清晰地显示骶髂关节的细微结构变化，有助于早期发现骶髂关节的炎症、破坏等情况，比X线更早发现病变，对于早期诊断强直性脊柱炎有重要意义。不同年龄患者进行CT检查时，需根据具体情况权衡辐射剂量等因素，一般儿童等对辐射敏感人群需谨慎选择。
磁共振成像（MRI）检查：MRI对软组织的分辨率高，在强直性脊柱炎早期就能发现骶髂关节骨髓水肿、炎症等病变，是目前诊断强直性脊柱炎骶髂关节病变较为敏感的影像学方法。对于有腰背痛等疑似症状但X线和早期CT无明显异常的患者，MRI检查有助于早期诊断。
实验室检查
HLA-B27检测：HLA-B27是与强直性脊柱炎密切相关的遗传标记物，强直性脊柱炎患者中HLA-B27阳性率较高，但HLA-B27阳性并不一定就患有强直性脊柱炎，HLA-B27阴性也不能完全排除强直性脊柱炎。不同年龄、性别人群HLA-B27阳性率有一定差异，在诊断时需结合临床症状和其他检查综合判断。
炎症指标检测：血沉（ESR）和C-反应蛋白（CRP）等炎症指标常升高，提示体内存在炎症反应。但炎症指标升高也可见于其他炎症性疾病，需结合临床情况进行分析。对于儿童患者，炎症指标的变化可能有其自身特点，需密切观察其动态变化。
综合患者的临床表现、影像学检查和实验室检查结果，由风湿科医生进行综合判断来确诊强直性脊柱炎。例如，患者有典型的腰背痛等临床表现，结合骶髂关节影像学出现典型的炎症、破坏等改变，同时HLA-B27阳性或炎症指标升高等，就可以较为明确地诊断为强直性脊柱炎。
