化疗痛苦程度无绝对固定哪一次最痛苦，受化疗药物、患者个体差异（身体状况、心理因素）、化疗方案等多方面因素影响，需综合这些因素评估，且医护人员会采取措施减轻患者痛苦。
一、化疗药物因素
不同的化疗药物有不同的副作用表现及程度。例如一些铂类药物（如顺铂），在用药后可能较早出现较为明显的胃肠道反应，如恶心、呕吐等，通常在用药后的1-2天内较为突出，但这也因个体差异有所不同。有些患者可能在首次使用含此类药物的化疗方案时就会感受到较强烈的胃肠道不适。而一些靶向化疗相关药物的副作用出现时间和程度也各有特点，有的可能在多次用药后才逐渐显现出特定的不良反应。
二、患者个体差异因素
1.身体状况
年龄方面：老年患者由于身体各器官功能相对减退，对化疗药物的耐受性往往较差，可能在化疗过程中更容易出现较严重的副作用，痛苦感受可能相对更明显。而儿童患者，因其身体处于生长发育阶段，化疗药物对其骨髓抑制等副作用的影响更为显著，可能在化疗后出现明显的骨髓抑制表现，如白细胞、血小板降低等，导致感染风险增加、出血倾向等，让患儿及家属感受到较大的痛苦，但这也因具体化疗方案和患儿个体情况不同而有所差异。
基础疾病：本身有胃肠道疾病的患者，在接受化疗时，胃肠道反应可能会更重，痛苦程度相对更高。例如本身就有胃溃疡的患者，使用化疗药物后胃肠道刺激可能加重溃疡相关症状，如腹痛等。有心脏基础疾病的患者，使用某些具有心脏毒性的化疗药物时，可能更早出现心悸、胸闷等心脏方面的不适，增加痛苦感受。
2.心理因素
心理压力较大的患者，对化疗副作用的感知可能更加敏感。比如一些对疾病过度担忧、焦虑情绪较重的患者，即使是相对较轻的化疗反应，也可能放大痛苦的感受。而心态较为乐观、能够积极配合治疗的患者，可能在一定程度上减轻对化疗痛苦的主观感受。
三、化疗方案因素
不同的化疗方案所含药物种类、剂量及组合不同，产生的副作用及痛苦程度也不同。例如，联合化疗方案通常比单一药物化疗方案副作用出现的概率更高、程度可能更重。一些高强度的化疗方案，在多次用药后可能会累积更多的副作用，如多次使用有神经毒性的化疗药物后，患者可能逐渐出现手足麻木等神经毒性反应，影响生活质量，增加痛苦。
总体而言，不能简单判定化疗第几次最痛苦，而是需要综合患者个体情况、化疗药物、化疗方案等多方面因素来综合评估，在化疗过程中医护人员会密切监测患者的反应，采取相应措施来减轻患者的痛苦，如使用止吐、升血细胞等药物来缓解相关副作用。
