硬下疳可通过临床表现特点、病史询问、实验室检查辨别，临床表现有好发部位及初期表现，病史询问含性接触史和既往病史，实验室检查有暗视野显微镜检查及血清学检查。
好发部位：硬下疳多见于男性的阴茎冠状沟、龟头、包皮及系带，女性的大小阴唇、阴蒂、宫颈等部位，也可见于肛门、直肠、口唇、乳房等部位。不同性别和年龄的人群，好发部位可能因生理结构差异而有所不同。例如，儿童若有不洁的接触史，也可能在相应部位出现硬下疳，但相对较少见。
初期表现：初起为小红斑，迅速发展为无痛性炎性丘疹，数天内丘疹扩大形成硬结，表面坏死形成单个直径为1~2cm、圆形或椭圆形的无痛性溃疡，边界清楚，周边水肿并隆起，基底呈肉红色，触之具有软骨样硬度，表面有浆液性分泌物，内含大量的梅毒螺旋体。不同年龄人群的皮肤黏膜特点不同，儿童的皮肤更娇嫩，硬下疳的表现可能在细节上与成人有差异，但基本的形态特征类似。
病史询问
性接触史：询问患者是否有不洁的性行为，包括近期是否有多个性伴侣、有无不安全性行为等。因为硬下疳主要通过性接触传播，不同生活方式的人群感染风险不同，有高危性行为的人群感染硬下疳的可能性明显增加。例如，有多个性伴侣的人群，相比单一固定性伴侣的人群，感染梅毒的概率更高，进而出现硬下疳的可能性也更大。
既往病史：了解患者既往是否有过梅毒感染史，以及是否接受过规范的治疗。有梅毒既往史的人群再次感染的情况需要重点关注，不同病史情况对硬下疳的辨别和诊断有重要参考价值。
实验室检查
暗视野显微镜检查：取硬下疳表面的分泌物，在暗视野显微镜下可直接观察到梅毒螺旋体。这是一种直接检测病原体的方法，对于明确硬下疳的诊断具有重要意义。不同标本的采集方法和质量会影响检测结果，在采集分泌物时要确保采集到足够的标本，以提高检测的阳性率。
血清学检查：包括非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验。非梅毒螺旋体抗原血清学试验常用的有快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）等，主要用于筛查和疗效观察；梅毒螺旋体抗原血清学试验常用的有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）等，主要用于确诊。不同年龄、健康状况的人群血清学检查的结果解读需要综合考虑。例如，孕妇由于生理状态的变化，血清学检查结果可能会有一定的特殊性，需要专业医生进行准确判断。
