自身免疫性溶血性贫血的诊断包括临床表现评估、实验室检查及病因鉴别诊断。临床表现评估需关注不同年龄人群表现差异、生活方式及病史相关因素；实验室检查有血常规（红细胞计数、血红蛋白浓度、网织红细胞计数异常）、外周血涂片（红细胞形态及白血小板计数情况）、血清胆红素测定（总胆红素及间接胆红素升高）、Coombs试验（直接阳性为重要证据，间接可阳性但不特异）、骨髓象检查（增生活跃，红系增生为主）、红细胞寿命测定（缩短）；病因鉴别需与其他溶血性贫血及其他贫血疾病鉴别。
一、临床表现评估
不同年龄人群表现差异：儿童患者可能出现面色苍白、黄疸、肝脾肿大等表现，黄疸程度可能因个体差异和病情轻重不同而有所不同，年龄较小的儿童可能难以准确表述不适，多表现为哭闹、精神萎靡等；成年患者除了上述表现外，还可能有乏力、头晕等全身症状，不同性别在症状表现上无明显特异性差异，但可能因基础健康状况不同而有所不同，例如有基础疾病的患者可能在原有症状基础上加重自身免疫性溶血性贫血相关表现。
生活方式相关影响：长期熬夜、劳累等不良生活方式可能会影响患者的免疫状态，进而可能影响自身免疫性溶血性贫血的病情，但生活方式更多是作为诱因或加重因素，在诊断中主要是辅助了解患者整体状况。
病史相关因素：既往有自身免疫性疾病史（如系统性红斑狼疮等）、感染史等可能提示自身免疫性溶血性贫血的发生风险。例如既往有系统性红斑狼疮病史的患者，自身免疫紊乱的基础存在，更容易出现自身免疫性溶血性贫血。
二、实验室检查
血常规检查
红细胞计数及血红蛋白浓度：红细胞计数减少，血红蛋白浓度降低，提示贫血。不同年龄正常红细胞计数及血红蛋白浓度有差异，儿童有其相应的正常参考范围，如新生儿血红蛋白正常范围约145-220g/L，随着年龄增长逐渐接近成人水平；成人男性血红蛋白正常范围约130-175g/L，女性约120-155g/L。
网织红细胞计数：网织红细胞计数升高，提示骨髓红系代偿性增生，这是自身免疫性溶血性贫血常见的表现之一，因为红细胞破坏增加，骨髓会增加红细胞生成来补偿。
外周血涂片检查
红细胞形态：可见球形红细胞、红细胞碎片等异常形态，球形红细胞增多提示可能为自身免疫性溶血性贫血等溶血性贫血类型，红细胞碎片则可能提示有微血管病性溶血性贫血等其他情况，但自身免疫性溶血性贫血时以球形红细胞等改变为主。
白细胞和血小板计数：一般白细胞和血小板计数无明显特异性改变，但如果是由自身免疫性疾病继发的自身免疫性溶血性贫血，可能会伴有白细胞或血小板的异常，如系统性红斑狼疮患者可能同时有白细胞减少、血小板减少等。
血清胆红素测定
总胆红素：总胆红素升高，以间接胆红素升高为主，这是因为红细胞破坏增多，产生大量间接胆红素，超过肝细胞的摄取、结合和排泄能力，导致血清间接胆红素升高。不同年龄总胆红素正常参考范围不同，新生儿总胆红素正常范围一般低于17.1μmol/L，儿童及成人总胆红素正常范围约3.4-17.1μmol/L。
直接胆红素：直接胆红素一般正常或轻度升高，因为肝细胞处理间接胆红素转化为直接胆红素的功能一般不受明显影响，主要是间接胆红素生成过多导致升高。
Coombs试验（抗人球蛋白试验）
直接Coombs试验：是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要指标，直接Coombs试验阳性，即红细胞表面结合有免疫球蛋白或补体，提示红细胞被自身抗体致敏，是自身免疫性溶血性贫血的直接证据。根据结合的抗体类型可分为IgG型、IgM型、C3型等不同亚型，不同亚型可能与不同的病因和病情相关。
间接Coombs试验：间接Coombs试验用于检测血清中游离的自身抗体，自身免疫性溶血性贫血时间接Coombs试验可阳性，但不如直接Coombs试验特异。
其他实验室检查
骨髓象检查：骨髓象增生活跃，以红系增生为主，粒红比例降低或倒置。红系中早幼红、中幼红等阶段细胞增多，巨核细胞系一般无明显异常。对于排除其他血液系统疾病导致的贫血有重要意义，例如与再生障碍性贫血等骨髓造血功能低下的疾病相鉴别。
红细胞寿命测定：通过放射性核素标记红细胞等方法测定红细胞寿命，发现红细胞寿命缩短，一般小于15天，这是溶血性贫血的重要依据，明确红细胞破坏加速。
三、病因鉴别诊断
与其他溶血性贫血鉴别：需要与遗传性球形红细胞增多症、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等其他溶血性贫血相鉴别。遗传性球形红细胞增多症有家族史，Coombs试验阴性，红细胞渗透脆性试验增高；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者有特定的酶缺乏相关实验室检查异常等。
与其他导致贫血的疾病鉴别：与缺铁性贫血、巨幼细胞贫血等其他原因导致的贫血相鉴别，缺铁性贫血有铁代谢相关指标异常，如血清铁降低、铁蛋白降低等；巨幼细胞贫血有维生素B12或叶酸缺乏的相关实验室检查异常，如血清维生素B12降低、叶酸降低等。
