血糖测定包括空腹血糖和随机血糖，空腹血糖低于2.8mmol/L等情况提示低血糖，随机血糖低于正常范围伴症状也是依据；胰岛素和C肽测定有助于鉴别低血糖原因，胰岛素瘤等可致胰岛素水平升高，C肽可排除外源性胰岛素干扰；糖化血红蛋白反映近2-3个月平均血糖水平，对低血糖诊断鉴别有意义；激发试验中的胰高血糖素试验适用于疑似胰岛素瘤患者，饥饿试验可模拟低血糖发作状态辅助诊断，儿童及基础疾病患者进行相关试验需特殊注意。
随机血糖：随时检测的血糖值，若随机血糖低于正常范围且伴有低血糖症状，也是低血糖的重要依据。
胰岛素和C肽测定
胰岛素：测定血液中胰岛素的水平，有助于鉴别低血糖的原因。若胰岛素水平升高，可能见于胰岛素瘤等疾病，胰岛素瘤患者体内胰岛素分泌不受正常血糖反馈机制的调控，会持续分泌较多胰岛素导致低血糖反复发生。对于儿童患者，胰岛素瘤相对少见，但也需考虑该可能性，通过检测胰岛素水平可辅助排查病因。
C肽：C肽与胰岛素以等分子数从胰岛β细胞分泌释放，测定C肽可以排除外源性胰岛素干扰，更准确地反映内源性胰岛素分泌情况。在判断低血糖原因时，C肽水平的变化能帮助区分是自身胰岛素分泌异常还是外源性胰岛素使用等情况导致的低血糖。例如，对于使用外源性胰岛素的糖尿病患者出现低血糖时，检测C肽水平可了解内源性胰岛素的分泌状态。
糖化血红蛋白（HbA1c）
反映近2-3个月的平均血糖水平，对于长期血糖控制情况的评估有重要意义。在低血糖的诊断和鉴别中，若HbA1c水平正常或偏低，可能提示近期血糖波动较大，需进一步排查低血糖的原因；若HbA1c水平偏高，结合其他指标可综合分析血糖控制与低血糖发生的关系。对于老年患者，长期的血糖控制情况通过HbA1c评估尤为重要，因为老年患者低血糖的后果可能更严重，通过HbA1c了解平均血糖水平有助于制定更合理的治疗和预防低血糖的方案。
激发试验
胰高血糖素试验：适用于疑似胰岛素瘤的患者。静脉注射胰高血糖素后，正常人群血糖会升高，而胰岛素瘤患者由于存在自主分泌胰岛素的肿瘤组织，血糖升高不明显或反而下降。对于儿童患者进行该试验时，需严格按照儿童的体重等情况调整药物剂量，并且要密切监测血糖变化，因为儿童对低血糖的耐受能力与成人不同，需特别关注试验过程中儿童的反应。
饥饿试验：让患者禁食，模拟可能导致低血糖发作的状态，监测血糖、胰岛素、C肽等指标。若在禁食一定时间后出现低血糖症状，同时伴有胰岛素水平升高，则支持胰岛素瘤等疾病导致的低血糖诊断。对于患有基础疾病的患者，如肝肾功能不全的患者进行饥饿试验时需谨慎，因为肝肾功能异常可能影响试验结果的判断，需要在试验过程中密切监测肝肾功能指标以及血糖等相关指标的变化。
