医生首先观察头皮外观表现并询问病史初步判断真菌感染脱发可能性，然后进行真菌学直接镜检，选取病变边缘与正常皮肤交界处的鳞屑、毛发等标本，滴加氢氧化钾溶液后镜检看有无菌丝或孢子，接着将标本接种到适宜培养基在特定温度下培养观察有无真菌生长及鉴定种类，还利用皮肤镜辅助观察微观结构变化，儿童检查要轻柔安抚，老年人需评估基础疾病耐受性并结合病史判断。
一、临床表现观察
医生会首先观察头皮的外观表现，留意是否存在红斑、鳞屑、断发、丘疹等异常情况，同时询问脱发的时间、进展速度等病史信息，初步判断是否有真菌感染相关脱发的可能性。
二、真菌学直接镜检
1.标本采集：选取头皮患处疑似受损的鳞屑、毛发等样本，样本采集需注意在病变边缘与正常皮肤交界处取材，以提高检出率。
2.镜检操作：将采集的标本置于载玻片上，滴加10%～20%氢氧化钾溶液，盖上盖玻片后轻压，去除气泡，然后在显微镜下观察。若发现菌丝或孢子，提示可能存在真菌感染。
三、真菌培养
1.标本接种：把采集的头皮鳞屑、毛发等标本接种到适宜的真菌培养基上，如沙保弱培养基等。
2.培养观察：将培养基置于适宜温度（一般25～28℃）下培养一定时间（通常1～3周），观察有无真菌生长，并通过形态学等方法鉴定真菌种类，明确致病真菌的具体类型，为后续治疗提供依据。
四、皮肤镜检查
利用皮肤镜对头皮及毛发进行微观观察，可辅助判断头皮及毛发的细微结构变化，如是否存在真菌感染相关的特征性表现，如毛发周围的鳞屑、菌丝在皮肤镜下的特殊形态等，进一步协助诊断真菌感染脱发。
特殊人群注意事项
儿童：检查时需轻柔操作，避免因患儿不配合导致样本采集不规范或造成头皮损伤，要充分安抚儿童情绪，确保检查顺利进行。
老年人：若老年人伴有基础疾病，如糖尿病等，需评估其身体状况对检查的耐受性，检查过程中要密切关注老年人的反应，确保检查安全，同时结合其基础病史综合判断真菌感染脱发的情况。
