破伤风诊断主要依典型临床表现，有创伤史尤其特定伤口，有肌肉强直性痉挛等症状，新生儿破伤风多有脐带消毒不严分娩史；实验室检查中病原菌培养阳性率低，血清学检查用于回顾性等；鉴别诊断需与化脓性脑膜炎、狂犬病、其他原因肌强直等区分，儿童患者需细察伤口及痉挛表现，新生儿破伤风关注脐带，对各年龄段创伤者详询创伤信息以排除其他病确保诊断准确。
实验室检查
1.病原菌培养：虽然伤口厌氧菌培养有时可分离出破伤风梭菌，但阳性率较低，因为破伤风梭菌是专性厌氧菌，其检出受多种因素影响，如标本采集时间、是否使用过抗生素等。
2.血清学检查：目前酶联免疫吸附试验（ELISA）等血清学方法可检测患者血清中的破伤风毒素抗体，但早期抗体可能尚未产生，所以血清学检查主要用于回顾性诊断或流行病学调查等情况。
鉴别诊断
1.化脓性脑膜炎：也可出现颈项强直等表现，但一般有高热、头痛、呕吐等症状，脑脊液检查可见白细胞计数明显升高，以中性粒细胞为主，糖含量降低，蛋白含量升高，而破伤风患者脑脊液常规多无明显异常。
2.狂犬病：有被病兽咬伤史，主要表现为恐水、怕风、咽喉肌痉挛等，与破伤风的肌肉痉挛表现有相似之处，但狂犬病患者一般有特殊的恐水症状，且破伤风无恐水表现。
3.其他原因引起的肌强直：如士的宁中毒、低钙血症等。士的宁中毒多有明确的药物接触史，其肌肉痉挛多为全身性强直性痉挛，可伴有角弓反张，但有特殊的惊厥表现；低钙血症引起的肌强直可通过血钙测定等实验室检查明确，血钙降低是其主要特征，而破伤风患者血钙一般正常。
对于儿童患者，由于其表述能力有限，更需仔细观察其伤口情况及肌肉痉挛的具体表现，新生儿破伤风要特别关注脐带部位的护理情况及患儿的一般状态。对于有创伤史的不同年龄段人群，都应详细询问创伤的相关信息，包括创伤时间、创伤程度、伤口处理情况等，以综合判断是否为破伤风。在诊断过程中，要排除其他类似疾病，确保诊断的准确性。
