溃疡性结肠炎的诊断需综合病史采集、临床表现观察、实验室检查、结肠镜检查及影像学检查等。病史采集要关注年龄、性别、生活方式及既往病史；临床表现有消化系统症状且不同年龄有特点；实验室检查包括血常规、粪便常规及病原学检查、血沉和C反应蛋白；结肠镜可直接观察肠道黏膜并活检；影像学检查有钡剂灌肠及腹部CT、MRI等，钡剂灌肠对重型患者有风险。
生活方式与病史：了解患者近期饮食情况，如是否有进食辛辣、油腻、刺激性食物等可能诱发或加重病情的因素；询问既往肠道疾病史，如是否有细菌性痢疾等肠道感染病史，以及既往是否有其他自身免疫性疾病史，因为溃疡性结肠炎属于自身免疫相关肠道疾病，其他自身免疫性疾病可能提示患者自身免疫紊乱的背景。
临床表现观察
消化系统症状：多数患者有腹泻，可为黏液脓血便，腹泻频率因人而异，轻者每日数次，重者可达十余次；还可出现腹痛，多为左下腹或下腹隐痛，可有疼痛-便意-缓解的规律；部分患者有腹胀、食欲不振等表现。不同年龄患者临床表现可能有特点，儿童患者可能除肠道症状外，还可能出现生长发育迟缓等情况。
实验室检查
血常规：患者可有贫血表现，血红蛋白降低；活动期可有白细胞计数升高。
粪便常规及病原学检查：粪便常规可见黏液脓血，镜检可见红细胞、白细胞，还需进行粪便病原学检查，如细菌培养等，以排除其他感染性肠炎，如细菌性痢疾等，不同年龄患者粪便检查结果可能因生理特点有所不同，儿童肠道屏障功能相对较弱，在病原学排除方面需更细致。
血沉（ESR）和C反应蛋白（CRP）：活动期患者血沉加快，C反应蛋白升高，这两项指标可反映炎症活动程度。
结肠镜检查
直接观察肠道黏膜：结肠镜是诊断溃疡性结肠炎的重要手段，可直接观察直肠、结肠黏膜病变，可见黏膜血管纹理模糊、紊乱或消失，黏膜充血、水肿、易脆、出血及脓性分泌物附着，病变多从直肠开始，呈连续性、弥漫性分布，可见多发性糜烂或溃疡等典型表现。不同年龄患者结肠镜操作需考虑其耐受性和肠道解剖特点，儿童进行结肠镜检查需更谨慎，评估麻醉风险等。
病理活检：取病变部位组织进行病理检查，可见黏膜及黏膜下层有淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞等浸润，隐窝炎、隐窝脓肿，杯状细胞减少等典型病理改变，有助于明确诊断及与其他肠道疾病鉴别。
影像学检查
钡剂灌肠检查：可见黏膜粗乱和（或）颗粒样改变，肠管边缘呈毛刺状或锯齿状，肠管缩短，结肠袋变浅、消失等，但对于重型患者可能诱发中毒性巨结肠等并发症，需谨慎使用，在儿童等特殊人群中更需评估风险后选择。
腹部CT或MRI检查：可了解肠道病变范围和程度等情况，有助于辅助诊断及排除其他肠道器质性病变。
