选取符合伦理规范的神经胶质瘤手术切除标本后30分钟内操作，用含双抗的PBS无菌低温冲洗，剪成均匀小块，用胰蛋白酶等消化酶37℃消化适时吹打，加血清终止，1000-1500r/min离心5-10分钟后用含适宜成分培养基重悬细胞，接种到培养瓶等置于37℃5%CO?培养箱并观察换液。
一、标本获取
1.标本来源与处理时限：选取符合伦理规范的神经胶质瘤手术切除标本，应在标本获取后30分钟内开展操作，以最大程度维持细胞活性，不同年龄、性别患者的标本处理遵循相同无菌操作原则，需严格避免标本污染，若患者病史存在特殊感染情况，需谨慎评估标本可用性。
2.标本清洗：用含双抗（青霉素、链霉素）的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗标本，去除血液等杂质，操作需在无菌环境下进行，保持低温（如冰上）以减少细胞损伤。
二、组织剪碎
将清洗后的组织剪成1mm3左右小块，通过精细操作保证组织块大小均匀，便于后续消化处理，操作过程持续保持低温环境，降低细胞因温度过高导致的活性丧失风险。
三、消化酶处理
1.消化酶选择：常用胰蛋白酶、胶原酶等，胰蛋白酶浓度一般为0.25%，根据组织块大小及细胞类型调整消化时间，通常37℃消化15-30分钟，消化过程中适时轻轻吹打，促进组织分散，不同消化酶的选择及消化条件需通过预实验优化，病史中有特殊感染等情况可能影响组织特性，进而影响消化效果。
2.消化终止：消化结束后加入含血清的培养基终止消化，终止过程需准确操作以确保消化完全终止，避免过度消化损伤细胞。
四、离心分离
1.离心参数：离心转速一般为1000-1500r/min，离心时间5-10分钟，通过离心使细胞沉淀与消化液等分离，离心操作需平稳，保证细胞沉淀效果良好。
2.沉淀重悬：将沉淀的细胞用含适宜比例血清和营养成分的培养基重悬，保证细胞均匀分散。
五、细胞接种与培养
1.接种：将重悬后的细胞接种到培养瓶或培养板中，保证接种密度适宜，置于37℃、5%CO?培养箱中培养，培养箱环境需稳定控制温度和二氧化碳浓度。
2.培养观察与换液：培养过程中密切观察细胞生长状态，定期换液，换液频率一般为2-3天一次，不同年龄患者在培养环境控制上无特殊差异，但需关注细胞随时间的营养需求变化，及时调整培养条件以维持细胞良好生长状态。
