视网膜母细胞瘤的诊断需从病史采集、眼部检查、影像学检查、荧光素眼底血管造影及基因检测等方面进行。病史采集关注年龄和家族史；眼部检查包括眼底和裂隙灯检查；影像学检查有B超、CT、MRI；FFA可观察视网膜血管情况；基因检测针对怀疑有遗传因素的患儿，检测RB1基因等。
家族史：询问家族中是否有视网膜母细胞瘤患者，因为该疾病有一定遗传倾向，若家族中有相关病史，患儿患病风险可能增加。
眼部检查
眼底检查：是诊断视网膜母细胞瘤的重要方法。通过直接或间接眼底镜检查，可发现眼底是否有异常肿块，肿块的大小、形态、位置等情况。视网膜母细胞瘤的眼底表现通常为灰白色或黄色隆起的肿块，边界可能清晰或不清晰。
裂隙灯检查：可观察眼前节情况，如角膜、前房、晶状体等是否受到肿瘤侵犯。例如，肿瘤可能侵犯晶状体，导致晶状体混浊等表现。
影像学检查
B超检查：能清晰显示眼内肿瘤的形态、大小、位置以及是否有钙化灶等。视网膜母细胞瘤在B超下常表现为实质性占位病变，内部可有点状或斑块状强回声，即钙化灶，这是视网膜母细胞瘤的特征性表现之一。
CT检查：对眼部骨质及肿瘤内部结构显示更为清晰。可明确肿瘤的范围，是否侵犯眼眶骨质等，有助于评估病情严重程度和制定治疗方案。视网膜母细胞瘤在CT上表现为眼内高密度肿块，伴有不同程度的钙化。
MRI检查：对于软组织的分辨力较高，能更好地显示肿瘤与周围组织的关系，尤其是对肿瘤是否侵犯视神经、颅内等情况的判断有重要价值。
荧光素眼底血管造影（FFA）
通过造影可观察视网膜血管的情况，了解肿瘤的血供等情况。视网膜母细胞瘤在FFA下可表现为肿瘤区域血管紊乱、异常荧光等表现，有助于辅助诊断和评估肿瘤的活性等。
基因检测
对于怀疑有遗传因素的视网膜母细胞瘤患儿，可进行基因检测，如检测RB1基因等。RB1基因的突变与视网膜母细胞瘤的发生密切相关，基因检测有助于明确遗传类型，对于家族遗传咨询等有重要意义。
