小儿自身免疫性溶血性贫血需通过病史采集、临床表现观察、实验室检查及鉴别诊断来明确。病史采集要问起病、诱因等；观察有无贫血、黄疸、肝脾肿大等表现；实验室检查包括血常规、溶血相关及自身抗体检查；需与其他溶血性贫血及特殊情况鉴别。
一、病史采集
详细询问患儿病史，包括起病急缓、有无感染诱因（如病毒感染等常见诱因）、是否接触过特殊药物或化学物质等。对于小儿自身免疫性溶血性贫血，了解家族中有无类似疾病史也很重要，因为部分自身免疫性疾病可能有遗传倾向，不同年龄小儿发病可能与不同病因相关，如新生儿期发病可能与母婴血型不合等因素有关。
二、临床表现观察
观察患儿有无贫血表现，如面色苍白、乏力等；有无黄疸表现，如皮肤、巩膜黄染等；还需注意有无肝脾肿大等表现，自身免疫性溶血性贫血患儿可能出现不同程度的肝脾肿大。
三、实验室检查
1.血常规检查
血红蛋白及红细胞计数下降，提示贫血。网织红细胞计数通常升高，这是因为骨髓代偿性增生以补充被破坏的红细胞。
外周血涂片可见红细胞形态改变，如球形红细胞增多等，球形红细胞增多常见于温抗体型自身免疫性溶血性贫血等情况。
2.溶血相关检查
血清胆红素测定：总胆红素升高，以间接胆红素升高为主，这是因为红细胞破坏增多，产生大量间接胆红素，超过了肝脏的处理能力。
血清结合珠蛋白降低：结合珠蛋白与游离血红蛋白结合，当溶血发生时，游离血红蛋白增多，结合珠蛋白消耗增加，导致其水平降低。
尿胆红素阴性，尿胆原增多：这是因为间接胆红素增多，经过肝脏处理后生成直接胆红素进入肠道，转化为尿胆原，尿胆原经肾排出增多，而直接胆红素一般正常，所以尿胆红素阴性。
3.自身抗体检查
抗人球蛋白试验（Coombs试验）：是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要依据。分为直接Coombs试验和间接Coombs试验。直接Coombs试验是检测吸附在红细胞表面的不完全抗体，阳性提示红细胞被自身抗体致敏；间接Coombs试验是检测血清中游离的不完全抗体，用于筛查潜在的自身抗体。根据Coombs试验结果可将自身免疫性溶血性贫血分为温抗体型（约占60%-70%）和冷抗体型（约占20%-30%）。温抗体型自身免疫性溶血性贫血的自身抗体主要是IgG，在37℃时作用活跃；冷抗体型主要为IgM，在低温时作用活跃。
其他自身抗体相关检查：有时还可能进行抗核抗体等自身免疫相关抗体检查，以排除其他自身免疫性疾病合并自身免疫性溶血性贫血的可能，不同年龄小儿自身免疫性疾病谱有所不同，如系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病在不同年龄段小儿中均可发病，可能合并自身免疫性溶血性贫血。
四、鉴别诊断
需要与其他原因引起的溶血性贫血相鉴别，如遗传性球形红细胞增多症、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等。遗传性球形红细胞增多症多有家族史，外周血涂片可见球形红细胞，Coombs试验阴性；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症常有诱因（如服用氧化性药物等），通过相关酶活性检测可鉴别。对于小儿患者，还需考虑新生儿溶血病等特殊情况，新生儿溶血病多有母婴血型不合，Coombs试验等检查可助鉴别。
