视网膜母细胞瘤的发生与遗传因素（约40%由遗传导致，存在RB1基因等突变或缺失）、基因突变（RB1基因关键，其他基因次要）、胚胎发育因素（胚胎发育中细胞分化异常）、年龄因素（多发生于3岁以下儿童，因视网膜快速发育易受影响）、性别因素（无明显差异）、生活方式因素（无确凿直接关联但健康生活方式有益）、病史因素（有先天性眼部等异常病史者风险增加）等多种因素相关。
基因突变
1.RB1基因的关键作用：RB1基因是一种抑癌基因，正常情况下它可以调控细胞的生长和分裂。当RB1基因发生突变时，其抑制细胞过度增殖的功能丧失。细胞就会不受控制地生长和分裂，进而形成视网膜母细胞瘤。这种基因突变可以是散发性的，即没有家族遗传背景，而是在胚胎发育过程中或者出生后体细胞偶然发生了RB1基因的突变。例如，在一些没有家族史的单个病例中，就是由于体细胞的RB1基因发生了突变导致发病。
2.其他相关基因的影响：除了RB1基因外，一些其他基因的异常也可能与视网膜母细胞瘤的发生有关，但相对RB1基因来说，其作用相对次要。比如一些与细胞周期调控、凋亡等相关的基因发生异常时，可能会协同促进视网膜母细胞瘤的发生发展，但目前研究相对RB1基因来说还不是特别深入和明确。
胚胎发育因素
在胚胎发育过程中，如果眼部的细胞分化出现异常，也可能导致视网膜母细胞瘤的发生。胚胎在发育早期，视网膜的前体细胞正常分化应该形成正常的视网膜结构，但由于某些未知的因素干扰，比如受到一些不良环境因素的影响（虽然具体机制尚不十分清晰），导致视网膜前体细胞不能正常分化，从而逐渐发展为视网膜母细胞瘤。这种胚胎发育过程中的异常分化可能是多种因素综合作用的结果，包括一些内在的基因调控异常以及可能存在的外界环境因素的影响，但目前对于胚胎发育过程中具体哪些因素确切导致视网膜母细胞瘤的发生还在进一步研究中。
年龄因素
视网膜母细胞瘤多发生在儿童时期，尤其是3岁以下的儿童较为常见。这是因为儿童的视网膜处于快速发育阶段，细胞分裂活跃，而RB1基因等相关基因的功能在儿童时期相对不稳定，更容易受到各种因素的影响而发生突变或功能异常。例如，新生儿出生后，视网膜的细胞还在不断分化和成熟过程中，此时如果有遗传因素或者体细胞突变等情况，就更容易引发视网膜母细胞瘤。而随着年龄增长，视网膜发育逐渐成熟稳定，患视网膜母细胞瘤的概率相对降低。
性别因素
目前并没有明确的证据表明视网膜母细胞瘤的发生存在明显的性别差异。男性和女性儿童患视网膜母细胞瘤的概率在总体上没有显著的不同分布情况。当然，在具体的个体病例中，可能会有一定的差异，但从大规模的流行病学调查来看，性别不是导致视网膜母细胞瘤发生的决定性因素。
生活方式因素
目前没有确凿的证据表明生活方式因素（如饮食、运动等）直接导致视网膜母细胞瘤的发生。但是一些不良的生活方式可能会间接影响机体的健康状况，从而在一定程度上可能对视网膜母细胞瘤的发生有一定的协同作用。例如，长期不健康的饮食可能导致儿童机体免疫力下降等，但这与视网膜母细胞瘤的直接因果关系还不明确。不过保持健康的生活方式，如均衡饮食、适量运动等，对于儿童整体健康是有益的，可能间接有助于降低包括视网膜母细胞瘤等疾病的发生风险，但这不是导致视网膜母细胞瘤发生的主要原因。
病史因素
如果儿童本身有一些先天性的眼部异常病史，或者有其他系统的一些先天性疾病病史，可能会增加患视网膜母细胞瘤的风险。例如，有先天性小眼球等眼部先天性异常的儿童，其视网膜发育本身就可能存在一定的异常基础，在此基础上更容易发生视网膜母细胞瘤。但这种病史因素并不是绝对的致病因素，只是增加了患病的可能性，具体还需要结合其他因素综合判断。
