乙肝病毒DNA检查有实时荧光定量PCR法其原理是利用荧光信号积累监测PCR进程靠标准曲线定量适用所有怀疑感染乙肝需评估复制等人群及相关风险人群;分支DNA信号放大技术原理是借分支DNA探针结合特定区域经信号放大系统检测适用人群与实时荧光定量PCR法类似;核酸序列依赖扩增技术(NASBA)原理是等温下经反转录等步骤扩增检测适用各类乙肝病毒感染相关检测人群。
实时荧光定量PCR法
原理:利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程,通过已知浓度的标准品制作标准曲线,从而对未知样本中的乙肝病毒DNA进行定量检测。其基本原理是在PCR反应体系中加入荧光基团,荧光信号的强度与PCR产物的数量呈正相关,随着PCR循环的进行,荧光信号不断累积,通过检测荧光信号的强度来确定样本中乙肝病毒DNA的含量。
操作步骤:首先采集患者的血液样本,然后对血液样本进行处理,提取其中的DNA。接着将提取的DNA加入到含有引物、探针、dNTPs、DNA聚合酶等成分的PCR反应体系中。在PCR仪中进行扩增反应,在每个循环的延伸阶段检测荧光信号,根据标准曲线计算出样本中乙肝病毒DNA的拷贝数。
适用人群:所有怀疑感染乙肝病毒,需要评估乙肝病毒复制水平、传染性以及抗病毒治疗疗效的人群,包括不同年龄、性别的乙肝患者,以及有乙肝感染风险因素的人群,如与乙肝患者有密切接触者、接受过输血或血制品者等。对于儿童患者,该方法同样适用,通过采集儿童的静脉血等样本进行检测,但在样本采集过程中要注意轻柔操作,避免儿童过度紧张。对于有乙肝病史的患者,定期进行乙肝病毒DNA检测可以评估病情变化和治疗效果。
分支DNA信号放大技术
原理:利用分支DNA探针与乙肝病毒DNA特定区域结合,通过信号放大系统使信号增强,从而检测乙肝病毒DNA的含量。其原理是分支DNA探针由多个臂组成,当探针与目标乙肝病毒DNA结合后,加入标记有报告分子的杂交探针,通过一系列反应使报告分子的信号得到放大,然后检测信号强度来定量乙肝病毒DNA。
操作步骤:同样需要采集患者的血液样本,提取DNA后,将样本与包被有捕获探针的微孔板孵育,使捕获探针与乙肝病毒DNA结合。然后加入分支DNA探针和杂交探针,经过一系列洗涤步骤后,加入酶底物,通过检测酶反应产生的信号来定量乙肝病毒DNA。
适用人群:与实时荧光定量PCR法类似,适用于各种年龄、性别的乙肝病毒感染相关检测人群。对于特殊人群,如儿童,在样本采集时要注意符合儿科采血的规范,减少儿童的痛苦。对于妊娠期的乙肝病毒感染女性,也可以通过该方法监测乙肝病毒DNA水平,评估母婴传播的风险等,但要考虑到妊娠期的生理特点对检测结果的影响相对较小,主要还是关注乙肝病毒DNA的定量情况来指导临床决策。
核酸序列依赖扩增技术(NASBA)
原理:在等温条件下,通过反转录、RNA合成和再反转录等步骤进行核酸的扩增,从而检测乙肝病毒DNA。其原理是利用反转录酶将乙肝病毒RNA转录为DNA,然后利用RNA聚合酶合成RNA,再通过反转录酶将RNA转录为DNA,如此反复进行等温扩增,最后通过检测扩增产物来定量乙肝病毒DNA。
操作步骤:采集样本后提取DNA,将样本加入到含有反转录酶、RNA聚合酶、引物等成分的反应体系中,在恒定温度下进行扩增反应,经过一定时间的扩增后,检测扩增产物来定量乙肝病毒DNA。
适用人群:适用于各类乙肝病毒感染相关检测人群。对于老年患者,该方法同样可以准确检测乙肝病毒DNA水平,在检测过程中要考虑到老年患者可能存在的采血困难等问题,尽量保证样本采集的顺利进行。对于有基础疾病的乙肝患者,无论是哪种基础疾病,该检测方法都可以提供乙肝病毒DNA定量的信息,帮助医生制定治疗方案等。



