实验室检查可见部分患者有轻度正细胞正色素性贫血、活动期血小板可升高、白细胞总数及分类多正常，血沉常增快反映疾病活动程度，CRP常升高提示疾病处于活动期，超九成强直性脊柱炎患者HLA-B27呈阳性但HLA-B27阳性不一定患病、阴性也不能排除；影像学检查中X线检查骶髂关节早期骨质疏松、关节间隙模糊等后期融合，脊柱可现相关病变，CT检查对早期骶髂关节病变及脊柱病变判断更敏感，MRI检查在骶髂关节和脊柱早期病变诊断及活动期判断上有重要价值；体格检查有骶髂关节压迫试验、“4”字试验及脊柱活动度检查，强直性脊柱炎患者可出现相应关节病变及脊柱活动度受限等情况不同性别和年龄患者表现可能有差异需结合临床综合分析。
血常规：部分患者可有轻度正细胞正色素性贫血，活动期患者血小板可升高，白细胞总数及分类多正常。
血沉（ESR）：血沉常增快，反映疾病的活动程度。
C反应蛋白（CRP）：CRP也常升高，同样提示疾病处于活动期。
人类白细胞抗原B27（HLA-B27）：超过90%的强直性脊柱炎患者HLA-B27呈阳性，但HLA-B27阳性者不一定患有强直性脊柱炎，HLA-B27阴性也不能排除强直性脊柱炎的可能，该检查对强直性脊柱炎的诊断有辅助价值。
影像学检查
X线检查
骶髂关节：早期X线表现为骶髂关节骨质疏松，关节间隙模糊，随后可出现关节面虫蚀样破坏、硬化，关节间隙狭窄，晚期可出现骶髂关节融合。
脊柱：病变向上发展累及脊柱时，可见椎体骨质疏松，方形变，椎小关节模糊、间隙变窄、融合，脊柱呈“竹节样”改变。不同年龄、性别患者的X线表现可能有一定差异，年轻患者相对早期病变可能更具可逆性，而老年患者可能合并更多骨质增生等退变表现。生活方式中长期伏案等不良姿势可能影响脊柱X线表现的判断，有强直性脊柱炎病史的患者需定期进行X线检查监测病情变化。
CT检查
骶髂关节：CT检查对于早期骶髂关节病变的诊断比X线更敏感，能发现X线不易察觉的轻微骨质破坏、关节间隙改变等，有助于更早地发现骶髂关节的病变，对于不典型的骶髂关节病变的诊断价值较高。
脊柱：可更清晰地显示脊柱小关节、椎体附件等部位的病变情况，对于判断脊柱病变的程度和范围有重要意义，尤其在评估脊柱关节融合情况等方面优于X线。
MRI检查
骶髂关节：MRI在骶髂关节病变的早期诊断中具有重要价值，能发现X线和CT尚未能显示的骨髓水肿、炎症浸润等病变，对于判断疾病的活动期有重要意义，比X线和CT更早地发现骶髂关节的炎性改变。
脊柱：可显示脊柱骨髓水肿、软组织炎症等情况，对于早期发现脊柱的病变以及评估病变的活动程度有很大帮助，在鉴别诊断脊柱其他病变方面也有一定优势。不同年龄患者的MRI表现可能因骨髓的生理特点有所不同，女性患者在妊娠等特殊生理时期可能影响骨髓信号的判断，需要结合临床综合分析。
体格检查
骶髂关节压迫试验：检查者用双手挤压患者的双侧骶髂关节，若出现疼痛，提示骶髂关节可能有病变。
“4”字试验：患者仰卧，一侧下肢屈膝屈髋，并将外踝置于对侧下肢膝上，检查者一手固定对侧髂嵴，一手向下压患侧膝部，若骶髂关节疼痛为阳性，提示骶髂关节病变。
脊柱活动度检查：包括颈椎前屈、后伸、侧弯，腰椎前屈、后伸、侧弯等活动度的检查，强直性脊柱炎患者可出现脊柱活动度不同程度的受限，如颈椎活动度减小，腰椎前屈、侧弯等活动度降低等。不同性别患者的脊柱活动度可能因生理结构等因素有一定差异，老年患者脊柱本身可能存在退变，活动度检查时需注意与强直性脊柱炎导致的活动受限相鉴别。
