葡萄糖耐量试验核心步骤为：试验前保持空腹8-12小时，采集空腹静脉血；口服75g葡萄糖粉溶于250-300ml温水，5分钟内饮用完毕；服糖后30分钟、1小时、2小时、3小时分别采血，测定血糖值，结合空腹值判断糖代谢状态。
一、普通成人标准步骤：试验前3天保持正常饮食，避免高糖高脂；前一天晚餐后禁食，确保空腹8-12小时；口服75g葡萄糖溶液，5分钟内喝完；服糖后30分钟、1小时、2小时、3小时采血，其中3小时采血辅助判断血糖恢复情况。
二、孕妇葡萄糖耐量试验：孕24-28周进行，试验前无需特殊饮食，空腹8-12小时；口服75g葡萄糖溶液，5分钟内饮用完毕；采血时间为空腹、1小时、2小时（部分医疗机构增加3小时），诊断标准为空腹≥5.1mmol/L、1小时≥10.0mmol/L、2小时≥8.5mmol/L。
三、儿童葡萄糖耐量试验（3-16岁）：根据体重计算葡萄糖剂量（1.75g/kg，上限75g），试验前空腹8-12小时；口服葡萄糖溶液后30分钟、1小时、2小时、3小时采血，无法耐受者可简化至空腹、30分钟、1小时、2小时；家长陪同避免儿童不配合，出现低血糖症状立即口服10g葡萄糖。
四、糖尿病高危人群：试验前2周停用影响血糖的药物，提前告知医生病史；体重<40kg者口服50g葡萄糖，其余按75g；若空腹血糖≥7.0mmol/L直接诊断糖尿病，无需完成试验；服糖后3小时血糖>13.9mmol/L需警惕糖尿病酮症风险。
