实验室检查包括血常规，部分患者有轻度贫血，活动期血沉和C反应蛋白常升高，HLA-B27检测对强直性脊柱炎诊断有辅助价值，部分患者免疫球蛋白可升高；影像学检查有X线、CT、MRI，X线是重要诊断方法，早期可见骶髂关节改变，CT对早期骶髂关节病变诊断更敏感，MRI能更早发现骶髂关节病变。
HLA-B27：强直性脊柱炎患者HLA-B27阳性率较高，约90%左右，但HLA-B27阳性不一定就是强直性脊柱炎，HLA-B27阴性也不能排除该病，其检测对强直性脊柱炎的诊断有一定辅助价值，不同人群HLA-B27阳性率有所差异，一般人群中HLA-B27阳性率约为6%~8%。
免疫球蛋白：部分患者免疫球蛋白可升高，尤其是IgA，其变化也与疾病活动度有一定关系，不同年龄阶段免疫球蛋白正常参考值不同，如儿童免疫球蛋白IgG正常参考值为2.5~12.5g/L，IgA为0.05~2.0g/L，IgM为0.05~2.0g/L。
影像学检查
X线检查：是诊断强直性脊柱炎的重要方法之一，早期可见骶髂关节骨质疏松、关节间隙模糊等，随着病情进展可出现骶髂关节面硬化、关节间隙狭窄甚至融合，不同年龄患者X线表现可能有一定差异，儿童患者骶髂关节X线表现相对不典型。
CT检查：对于早期骶髂关节病变的诊断较X线更为敏感，能发现X线难以察觉的轻微骨质破坏等情况，可更清晰地显示骶髂关节的结构，帮助更早地发现病变。
磁共振成像（MRI）检查：在疾病早期就能发现骶髂关节的骨髓水肿、炎症等病变，比X线和CT更早地检测到强直性脊柱炎的病理改变，对于早期诊断和评估病情活动度有重要意义，不同年龄段患者进行MRI检查时需根据具体情况调整检查参数等。
