实验室检查包括血常规，部分患者有轻度贫血，活动期血沉增快、C反应蛋白升高，HLA-B27检测约90%患者阳性但非确诊依据；影像学检查有X线可现骶髂关节及椎体改变、CT对骶髂关节病变更敏感准确、MRI对早期病变诊断价值高；其他检查关节超声可观察关节滑膜等情况。
HLA-B27检测：HLA-B27阳性在强直性脊柱炎患者中的阳性率较高，约90%左右的患者HLA-B27呈阳性，但HLA-B27阳性不一定就患有强直性脊柱炎，HLA-B27阴性也不能完全排除该病，它对强直性脊柱炎的诊断有一定的辅助价值。
影像学检查
X线检查：是诊断强直性脊柱炎的常用方法。早期X线表现可无明显异常，随着病情进展，可出现骶髂关节间隙模糊、狭窄甚至消失，椎体呈“竹节样”改变等。例如，在疾病早期，骶髂关节的X线可能仅表现为轻度的骨质疏松，随着病情发展，会逐渐出现关节面的破坏等典型表现。对于不同年龄的患者，X线检查的表现可能会有一定差异，年轻患者可能相对早期的改变更容易被发现，而老年患者可能合并有其他退行性改变需要鉴别。
CT检查：对于骶髂关节病变的诊断比X线更敏感和准确。能更早发现骶髂关节的细微病变，如软骨下骨的侵蚀、硬化等。对于有可疑骶髂关节病变但X线表现不典型的患者，CT检查有助于明确诊断。在生活方式方面，长期从事重体力劳动等可能影响关节的患者，CT检查能更清晰地显示病变情况。
MRI检查：对骶髂关节病变的早期诊断价值更高。可以发现X线和CT尚不能检测到的骨髓水肿、滑膜炎症等早期病变。在病史方面，对于有强直性脊柱炎家族史或疑似早期病变的患者，MRI检查能更早地发现病变，从而更早进行干预。
其他检查
关节超声检查：可以观察骶髂关节及外周关节的滑膜炎症、积液、关节腔增生等情况，有助于早期发现外周关节受累情况。对于女性患者，由于其解剖结构等因素，外周关节受累可能有不同的表现，关节超声检查能更细致地观察相关病变。在生活方式方面，经常进行剧烈运动等可能导致关节损伤的患者，超声检查能及时发现关节的异常情况。
