新生儿溶血发现时间因个体差异和溶血情况有所不同，出生后早期可通过观察皮肤颜色、贫血表现初步怀疑，出生后即可通过血常规检查发现红细胞、血红蛋白等异常，出生后1-2天内通过血型及溶血相关抗体检查明确，有高危因素新生儿需更密切观察尽早发现，早发现利于及时干预治疗改善预后。
出生后早期观察表现
皮肤颜色：新生儿出生后若存在溶血情况，可能在出生后几小时内就出现皮肤黄染，且黄染程度可能进展较快。这是因为溶血导致胆红素生成过多，超过了新生儿肝脏的代谢能力，从而引起皮肤、黏膜黄染。比如，ABO血型不合引起的溶血，部分新生儿在出生后24小时内就可能出现明显的皮肤黄染。
贫血表现：轻度溶血时，新生儿可能仅表现为面色稍苍白；中重度溶血时，面色苍白会较为明显，同时可能伴有心率增快等表现。一般在出生后就能通过观察新生儿的一般状态来初步怀疑是否存在溶血情况。
实验室检查发现
血常规检查：出生后可通过血常规检查来发现新生儿溶血相关迹象。如果红细胞计数、血红蛋白浓度进行性下降，网织红细胞计数升高，提示可能存在溶血导致的红细胞破坏增加。例如，正常新生儿出生后血红蛋白会有生理性下降，但如果下降幅度异常增大且网织红细胞升高，就要考虑溶血可能。一般在新生儿出生后即可进行血常规检查，通常在出生后24小时内就可以完成初步的血常规检测来辅助判断是否有溶血。
血型及溶血相关抗体检查：首先要检查新生儿及其父母的血型。比如，若母亲是O型血，父亲是A、B或AB型血，新生儿就有发生ABO血型不合溶血的可能。同时，还会检测新生儿体内是否存在针对母亲血型抗原的抗体。一般在新生儿出生后会尽快进行血型鉴定以及相关抗体筛查，通常在出生后1-2天内可以完成这些检查来明确是否存在溶血以及溶血的类型。例如，通过直接抗人球蛋白试验等方法检测新生儿红细胞上是否存在抗体，若试验结果阳性，结合血型情况等就可以确诊新生儿溶血。
对于有高危因素的新生儿，如母亲为O型血且既往有不良妊娠史（如既往有新生儿溶血病史等）的新生儿，在出生后应更加密切观察，尽早进行相关检查以争取早发现新生儿溶血情况，以便及时采取相应的治疗措施，降低新生儿溶血可能导致的严重并发症，如胆红素脑病等的发生风险。新生儿溶血发现时间越早，越有利于及时干预治疗，改善预后。
