强直性脊柱炎的临床表现为腰背部隐匿起病、夜间或休息时加重、活动后缓解，可伴外周关节痛及脊柱活动受限；影像学检查中，X线早期骶髂关节改变不敏感，CT可清晰显示早期病变，MRI对早期病变敏感；实验室检查中，HLA-B27阳性率高但非确诊依据，炎症指标活动期升高；诊断常用修订纽约标准，需综合多方面因素，儿童患者诊断需谨慎，要排除其他类似疾病。
影像学检查
骶髂关节X线检查：早期可能表现为骶髂关节面模糊，关节间隙轻度增宽或变窄等，随着病情发展，会出现骶髂关节面硬化、侵蚀，关节间隙消失等典型改变，不过X线对于早期骶髂关节病变的敏感性相对有限。
骶髂关节CT检查：相较于X线，CT检查能更清晰地显示骶髂关节的细微结构，有助于发现早期骶髂关节的炎症、侵蚀等病变，能更早地察觉骶髂关节的异常改变。
磁共振成像（MRI）检查：MRI对骶髂关节病变的敏感性较高，在疾病早期就能发现骶髂关节骨髓水肿、炎症浸润等改变，对于早期诊断强直性脊柱炎具有重要价值。
实验室检查
人类白细胞抗原B27（HLA-B27）检测：HLA-B27阳性在强直性脊柱炎患者中的阳性率较高，但并非所有HLA-B27阳性者都会发展为强直性脊柱炎，不过HLA-B27检测是辅助诊断强直性脊柱炎的一个重要指标。一般来说，HLA-B27阳性的人群患强直性脊柱炎的风险相对较高，但还需要结合临床症状和其他检查综合判断。对于女性患者，HLA-B27阳性时也需要警惕强直性脊柱炎的可能，因为女性强直性脊柱炎患者的临床表现可能相对不典型，但同样可能出现骶髂关节及脊柱的病变；对于有家族病史的人群，HLA-B27检测更有意义，若家族中有强直性脊柱炎患者，自身HLA-B27阳性，那么患强直性脊柱炎的风险会增加。
炎症指标检查：血沉（ESR）和C-反应蛋白（CRP）等炎症指标在强直性脊柱炎活动期常升高，反映疾病的活动程度，但这些指标升高也可见于其他炎症性疾病，需要结合临床情况进行综合分析。例如，在病情活动时，ESR和CRP会升高，而病情缓解时可能会下降，但并不是特异性的指标。
诊断标准
目前常用的是修订的纽约标准。临床标准包括下腰背痛病程至少3个月，疼痛随活动改善，但休息不减轻；腰椎在前后和侧屈方向活动受限；胸廓活动度低于相应年龄、性别正常人。放射学标准为骶髂关节炎，双侧≥Ⅱ级或单侧Ⅲ-Ⅳ级。符合放射学标准和1项及以上临床标准者可以确诊为强直性脊柱炎。在诊断过程中，需要综合考虑患者的临床表现、影像学检查、实验室检查等多方面因素，排除其他可能导致类似症状的疾病，如类风湿关节炎、银屑病关节炎、炎性肠病性关节炎等。对于儿童和青少年患者，由于其骨骼发育尚未成熟，在诊断时需要更加谨慎，除了遵循上述诊断标准外，还需要关注儿童患者的生长发育情况以及是否存在其他可能影响诊断的因素，同时要考虑到儿童强直性脊柱炎可能具有一些不同于成人的特点，如外周关节受累相对更常见等情况。
