为诊断新生儿溶血症，需详细采集孕妇既往妊娠史等病史，进行血型检查确定孕妇及胎儿血型，通过血清学检查检测抗体效价、胆红素等，必要时行影像学检查评估心脏等器官情况，尤其要考虑早产儿及特殊病史孕妇所生新生儿的特殊情况。
一、病史采集
详细询问孕妇既往妊娠史，有无不明原因的流产、死胎、新生儿黄疸史等。若孕妇为O型血，其配偶为非O型血时，需高度警惕新生儿溶血症可能，这与母婴血型不合导致免疫反应相关，不同血型组合引发溶血症的风险不同，如O型血孕妇与A型、B型或AB型血丈夫孕育的胎儿易发生ABO血型不合溶血症，而Rh阴性孕妇首次妊娠时一般不发病，但再次妊娠时若胎儿为Rh阳性则可能引发Rh血型不合溶血症。
二、实验室检查
（一）血型检查
1.孕妇血型：确定孕妇的ABO血型和Rh血型。若孕妇为O型血，需进一步检查其丈夫血型；若孕妇为Rh阴性，要明确其配偶Rh血型情况。因为ABO血型不合溶血症主要发生在孕妇O型、丈夫非O型血时，Rh血型不合溶血症则与孕妇Rh阴性、胎儿Rh阳性相关。
2.胎儿血型：可通过羊水穿刺等方法检测胎儿血型，但该操作有一定风险，需严格掌握适应证。对于有高危因素的孕妇，如既往有新生儿溶血症病史的孕妇，可在妊娠中晚期通过相关方法推测胎儿血型，为后续诊断提供依据。
（二）血清学检查
1.抗体筛查
ABO血型不合溶血症相关抗体：检测孕妇血清中抗A或抗B抗体效价。一般来说，当抗A或抗B抗体效价≥1：64时，胎儿发生ABO血型不合溶血症的风险增加。随着妊娠进展，抗体效价可能会逐渐升高，通过动态监测抗体效价变化能评估胎儿受累程度。例如，有研究表明，抗体效价持续升高的孕妇，胎儿发生重度溶血症的概率相对较高。
Rh血型不合溶血症相关抗体：检测孕妇血清中抗Rh抗体。Rh阴性孕妇首次妊娠时，血清中抗Rh抗体通常为阴性，但在妊娠晚期或分娩时，少量胎儿红细胞可进入母体循环，刺激母体产生抗Rh抗体。若再次妊娠胎儿为Rh阳性，母体已产生的抗Rh抗体可通过胎盘进入胎儿体内，引发免疫反应。当血清中抗Rh抗体效价升高时，提示胎儿可能受累，需要密切关注。
2.胆红素测定
胎儿胆红素情况：通过检测羊水胆红素水平可了解胎儿溶血程度。羊水胆红素含量越高，提示胎儿溶血越严重。正常羊水胆红素含量较低，当胎儿发生溶血症时，红细胞破坏增多，胆红素生成增加，经胎盘进入羊水，导致羊水胆红素水平升高。例如，羊水胆红素OD450值＞0.06时，提示胎儿有溶血损害；OD450值＞0.12时，胎儿可能已有明显溶血。
新生儿胆红素测定：对于出生后的新生儿，检测血清总胆红素、直接胆红素和间接胆红素水平。新生儿溶血症时，由于大量红细胞破坏，间接胆红素生成增多，血清间接胆红素明显升高。通过监测新生儿胆红素水平变化，能及时发现高胆红素血症，以便采取相应的干预措施，如光疗等，防止胆红素脑病等严重并发症的发生。一般出生后24小时内出现黄疸且胆红素水平迅速上升的新生儿，需高度怀疑新生儿溶血症，应及时进行相关检查明确诊断。
（三）红细胞相关检查
1.红细胞计数：新生儿溶血症时，由于红细胞破坏增多，红细胞计数可能降低。例如，重度溶血症患儿红细胞计数可明显低于正常范围，同时血红蛋白含量也会下降，出现贫血表现。通过红细胞计数和血红蛋白测定能评估患儿贫血程度，为临床治疗提供依据。
2.网织红细胞计数：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，新生儿溶血症时，骨髓造血功能活跃，网织红细胞计数会升高。一般网织红细胞计数＞6%提示骨髓造血代偿性增生，可反映红细胞破坏的程度。例如，在ABO血型不合溶血症患儿中，网织红细胞计数常明显升高，这是机体对红细胞破坏的一种代偿反应。
三、影像学检查（必要时）
对于怀疑有严重贫血导致心脏等器官受累的新生儿，可进行超声心动图检查，评估心脏结构和功能，如是否存在心功能不全、心脏扩大等情况。超声心动图能直观地观察心脏各腔室大小、心肌运动情况以及血流动力学变化，有助于全面评估新生儿溶血症对心血管系统的影响，为制定治疗方案提供参考。例如，严重贫血的新生儿可能出现心脏扩大、心肌收缩功能减退等超声表现，提示需要及时纠正贫血，改善心脏功能。
四、特殊人群考虑
对于早产儿，由于其各器官发育尚未成熟，在进行新生儿溶血症检查时需更加谨慎。早产儿的胆红素代谢能力更弱，发生高胆红素血症的风险更高，且对胆红素脑病的耐受性更差。在进行血型检查、血清学检查等操作时，要注意操作的轻柔性和准确性，避免对早产儿造成额外的损伤。同时，对于有特殊病史的孕妇所生新生儿，如既往有新生儿溶血症患儿的孕妇所生新生儿，要重点关注其溶血症相关检查，因为这类新生儿再次发生溶血症的概率相对较高，需加强监测和早期干预。
