梅毒疹的诊断需进行病史采集，包括性接触史和既往病史；观察临床表现，如一期硬下疳、二期多样皮疹、三期结节性梅毒疹和树胶肿等；进行实验室检查，暗视野显微镜查螺旋体、血清学检查（非梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗原血清学试验）；还有组织病理检查辅助诊断，不同人群在诊断中各有特点，需综合多种检查手段诊断梅毒疹。
既往病史：了解患者既往是否有其他性传播疾病史，因为同时患有其他性传播疾病会增加梅毒感染的易感性。此外，还要询问患者是否有免疫功能低下相关疾病，如艾滋病等，免疫功能低下的患者感染梅毒后病情可能更严重且难以控制。
临床表现观察
皮疹特点
一期梅毒疹：主要表现为硬下疳，通常为单个无痛性的溃疡，边界清晰，基底平坦，触之有软骨样硬度。一般发生在梅毒螺旋体侵入部位，多为生殖器部位，如男性的阴茎、冠状沟、龟头，女性的大小阴唇、宫颈等部位，但也可能出现在口唇、舌、乳房等其他部位。
二期梅毒疹：皮疹形态多样，可呈斑疹、丘疹、脓疱疹等。斑疹性梅毒疹多为淡红色或褐红色，大小不等，直径约0.5-1cm，常泛发对称分布于躯干、四肢屈侧等部位；丘疹性梅毒疹可分为扁平湿疣，好发于肛门周围、外生殖器等皮肤互相摩擦和潮湿的部位，为扁平的丘疹，表面湿润，含有大量梅毒螺旋体；还有银屑病样、环状梅毒疹等多种形态。
三期梅毒疹：皮肤黏膜损害可出现结节性梅毒疹，为皮下结节，直径约0.3-1cm，呈簇集状分布，质地较硬，可融合成大的斑块，表面可破溃；树胶肿为无痛性的皮下结节，逐渐增大，中心软化破溃，形成穿凿性溃疡，愈后留有瘢痕。
实验室检查
暗视野显微镜检查：取一期梅毒硬下疳部位的渗出液或淋巴结穿刺液，在暗视野显微镜下可直接观察到运动活泼的梅毒螺旋体，这是梅毒的确诊方法之一。但该方法需要有经验的检验人员操作，且阳性率受取材部位、标本质量等因素影响。
血清学检查
非梅毒螺旋体抗原血清学试验：常用的有快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清学试验（TRUST）等。这类试验是用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原，检测患者血清中的反应素（抗心磷脂抗体）。其优点是操作简便、价格低廉，可用于筛查、疗效观察及复发或再感染的监测。但该试验有假阳性和假阴性情况，假阳性可见于自身免疫性疾病、急性感染性疾病等；假阴性可见于一期梅毒硬下疳早期、晚期梅毒患者等。
梅毒螺旋体抗原血清学试验：常用的有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）、荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）等。这类试验是用梅毒螺旋体作为抗原，检测血清中的特异性抗体，特异性较高，一般用于确诊梅毒。一旦阳性，即使患者经过正规治疗，血清学反应仍可能终身阳性。
组织病理检查
取皮疹组织进行病理检查，可见表皮细胞间水肿，真皮浅层及深层血管周围有淋巴细胞、浆细胞及组织细胞浸润等特异性病理改变，对梅毒的诊断有辅助价值，但一般不作为首选的确诊方法。
不同年龄、性别、生活方式和病史的人群在梅毒疹诊断中各有特点。例如，儿童感染梅毒可能通过母婴传播，临床表现可能不典型，需要更细致地观察和全面的检查；女性患者在询问病史时要特别注意性接触史的详细询问；有高危性生活方式的人群要提高对梅毒疹诊断的警惕性；有免疫功能低下病史的患者在进行实验室检查时要考虑到可能出现的假阴性等情况，需要结合多种检查手段综合诊断梅毒疹。
