强直性脊柱炎的实验室检查包括血常规可初步了解有无贫血及感染等，ESR和CRP常升高且与疾病活动度相关，HLA-B27约90%患者阳性但非绝对诊断依据；影像学检查有X线可见骶髂关节及脊柱变化、CT对骶髂关节病变诊断更敏感准确、MRI能早期发现骶髂关节病变评估活动度。
红细胞沉降率（ESR）和C反应蛋白（CRP）：ESR和CRP常升高，且与疾病活动度相关。ESR是反映炎症活动的一个指标，在强直性脊柱炎活动期往往明显增快；CRP也是炎症标志物，疾病活动时会升高，通过监测这两个指标可以评估病情的活动程度。
HLA-B27：90%左右的强直性脊柱炎患者HLA-B27阳性，但HLA-B27阳性者不一定就是强直性脊柱炎，因为在正常人群中也有一定比例的HLA-B27阳性率。HLA-B27检测对强直性脊柱炎的诊断有一定的辅助价值，尤其是在临床表现疑似但不典型的情况下。
影像学检查
X线检查：是诊断强直性脊柱炎的重要手段之一，早期可见骶髂关节骨质疏松，关节面模糊，进而出现骨质硬化、关节间隙狭窄甚至消失等改变；随着病情进展，可见脊柱呈“竹节样”改变等。X线检查可以观察骶髂关节及脊柱的形态结构变化，对于明确病变部位和程度有重要意义，但早期病变可能在X线上显示不明显。
CT检查：对于骶髂关节病变的诊断比X线更敏感和准确，能发现X线难以察觉的早期骶髂关节的细微变化，如关节面的微小侵蚀、硬化等，有助于早期诊断强直性脊柱炎。
磁共振成像（MRI）：在疾病早期就能发现骶髂关节的骨髓水肿、炎症等病变，比CT和X线更早地检测到骶髂关节的炎性改变，对于早期诊断和评估疾病活动度有重要作用。例如，MRI可以发现骶髂关节滑膜的炎症、关节腔的渗出等情况。
