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高催乳素血症的诊断主要依据临床症状、血液学检查、影像学检查、眼底检查等。对于出现月经紊乱、闭经、不育、溢乳、多毛、青春期延迟者，应考虑到本病，测定血清的性激素水平，检查催乳素时最好在上午9：00～12：00。
如果血清催乳素水平小于100ng/mL，应该先排除诸多由生理性或药物，甲状腺、肝肾功能病变引起的高催乳素血症。如果催乳素的水平达到100ng/mL以上，同时有临床症状的患者，应该进行垂体的磁共振检查，明确是否存在垂体占位性病变。
占位性病变通常与血清催乳素水平高低和流体的大小相平行，由于垂体腺瘤可以侵犯或者压迫视交叉，可能会引起乳头水肿，也可能会由于肿瘤的压迫视交叉，导致视野缺损，因而眼底检查、视野检查有助于确定垂体腺瘤的大小和部位。
